宿主整合因子对伤寒沙门菌动力的影响(2)

1.3 统计学分析

采用GraphPad Prism 5.0统计软件分析数据，数据以均数±标准差表示；组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用Dunnett-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 伤寒沙门菌回补株himA-C和himD-C的构建

结果如图1所示，成功构建含有himA、himD编码片段的pBAD33回补质粒，并经测序验证正确。将回补质粒利用电转化的方式导入相应基因缺失株，即成功构建回补株himA-C、himD-C。

1：PCR验证；2：质粒酶切验证；M：DNA标准参照物图1 IHF缺失回补载体的构建

2.2himA和himD缺失后对伤寒沙门菌动力的影响

动力实验结果如图2显示，与WT-pBAD相比，△himA-pBAD与△himD-pBAD的动力圈直径明显减小(t=14.00，10.58，P均<0.05)，himA-C、himD-C的动力圈与WT-pBAD基本一致，差异无统计学意义(P>0.05)。结果表明，himA和himD对伤寒沙门菌的动力起促进作用。

2.3himA和himD对伤寒沙门菌鞭毛基因mRNA表达的影响

qRT-PCR结果如图3显示，△himA-pBAD中鞭毛基因flhD、fliA、fljB的mRNA表达水平均明显低于WT-pBAD(t=9.55，8.1，11.25，P<0.05或<0.01)；△himD-pBAD中flhD、fliA、fljB的mRNA表达水平同样明显低于WT-pBAD(t=10.2，8.1，12.5，P<0.05或<0.01)。由此表明，himA和himD均能够正向调节伤寒沙门菌鞭毛基因flhD，fliA和fljB等mRNA表达。

图2 伤寒沙门菌动力实验

图3 qRT-PCR检测各菌株中鞭毛基因flhD，fliA和fljB的mRNA表达

3讨论

IHF作为全局调控因子，在多种细菌的基因调控网络中起重要重用，参与致病进程。在新月柄杆菌中，IHF抑制细菌动力；在大肠埃希菌和鼠伤寒沙门菌中，IHF激活细菌动力[8-9]。伤寒沙门菌是一种具有双相鞭毛革兰阴性菌，其鞭毛的构成及功能有特殊性[10]。本研究发现，缺失himA或himD后，伤寒沙门菌动力明显减弱，表明IHF能够促进伤寒沙门菌的动力。

鞭毛是细菌重要的动力器官，在致病过程中发挥重要功能，如细菌定植和侵袭、感染位点的维持、感染后的扩散等[11]。伤寒沙门菌鞭毛的调控机制复杂，有50余个基因参与鞭毛的合成，按照转录调控级别可分为三级。本研究选取的flhD、fliA和fljB分别属于伤寒沙门菌的一、二、三级鞭毛基因，其中fljB为伤寒沙门菌GIFU所特有H:z66的编码基因[10]。本研究结果显示，himA和himD均能够正向调节伤寒沙门菌鞭毛基因flhD，fliA和fljB等mRNA表达。

调控因子对靶基因的调节方式有直接与间接两种方式，前者是指调控因子能够直接结合到靶基因的启动子序列，调节转录；后者则通过调节其他调控因子，影响靶基因转录[12]。后续研究中，我们将表达IHF蛋白，分析IHF对于鞭毛基因的调控方式。

综上所述，本研究初步揭示宿主整合因子IHF能够增强伤寒沙门菌的动力，并正向调节鞭毛基因的转录。

[1] 陈龙，杨璐璐，李敏，等.多黏菌素B刺激下伤寒沙门菌mig-14基因的表达特性[J].江苏大学学报(医学版)，2017，27(3):243-247.

[2] 汪伟伟，夏歆，王静瑜，等.伤寒沙门菌外膜孔道蛋白ompC、ompF缺陷株的制备及其耐药性[J].江苏大学学报(医学版)，2015，25(6):532-535，542.

[3] 吉滢，倪斌，张义全，等.QseBC双组分调控系统对伤寒沙门菌动力的调节作用[J].军事医学，2015，39(5):357-359，367.

[4] 陆仁飞，孙嘉瑶，黄新祥.伤寒沙门菌sRNA S2959增强细菌动力和生物膜形成能力[J].临床检验杂志，2018，36(10):774-778.

[5] 孙嘉遥，陆仁飞，赵昕，等.小RNA SbfR增强伤寒沙门菌动力和侵袭力[J].江苏大学学报(医学版)，2018，28(1):47-50.

[6] Du H,Sheng X,Zhang H,et al. RpoE may promote flagellar gene expression inSalmonellaentericaserovar Typhi under hyperosmotic stress[J]. Curr Microbiol,2011,62(2): 492-500.

[7] Gerstel U,R?mling U. Complex regulation ofcsgDpromoter activity by global regulatory proteins[J]. Mol Microbiol,2003,49(3): 639-654.

[8] Mangan MW,Lucchini S,Danino V,et al. The inte-gration host factor (IHF) integrates stationary-phase and virulence gene expression inSalmonellaentericaserovar Typhimurium[J]. Mol Microbiol,2006,59(6): 1831-1847.

[9] Muir RE,Gober JW. Role of integration host factor in the transcriptional activation of flagellar gene expression inCaulobactercrescentus[J]. J Bacteriol,2005,187(3): 949-960.

[10] Xu S,Zou X,Sheng X,et al. Expression of FLJB:Z66 on a linear plasmid ofSalmonellaEntericaSerovarTyphiis dependent on FLIA and FLHDC and regulated by OMPR[J]. Braz J Microbiol,2010,41(3): 729-740.

[11] Chaban B,Hughes HV,Beeby M. The flagellum in bacterial pathogens: For motility and a whole lot more[J]. Semin Cell Dev Biol,2015,46: 91-103.

文章来源：《航空动力学报》 网址: http://www.hkdlxbzz.cn/qikandaodu/2021/0522/1177.html